2分鐘前 浙江PCR實驗室服務至上 南京英瀚斯[英瀚斯2eefa30]內容：ELISA 是一種結合抗原、抗ti特異性反應和酶對底物高xiao催化作用的高敏感性免yi學實驗技術。(1)加入12μ1的TSR于離心管中，劇烈振蕩，讓其充分溶解DNA沉淀，稍離心。ELISA 的基礎是抗原或抗ti的固相化及抗原或抗ti的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗ti仍保持其免yi學活性，酶標記的抗原或抗ti既保留其免yi學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本(測定其中的抗ti或抗原)與固相載體表面的抗原或抗ti起反應，洗滌使固相載體上形成的抗原抗ti復合物與液體中的其他物質分開，再加入酶標記的抗原或抗ti，通過反應使其結合在固相載體上。此時固相上的酶含量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。

聚合酶鏈式反應(PCR)

操作步驟

1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。

1QPCR buffer

5 μl

dNTP mix( 2mM )

4 μl

引物1(10pM)

μl 2

引物2 ( 10pM)

2μl

Taq酶(2U/ul)

1 μl

DNA模板( 50ng-1μg/μl )

1 μl

加ddH2O至

μl 50

視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。

2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上執行擴增。-般:在93°C

預變性3-5min ,進入循環擴增階段: 93°C 40s→58°C 30s→72°C 60s ,循環30-35

次，后在72°C保溫7min。

3.結束反應, PCR產物放置于4°C待電泳檢測或-20°C長期保存。

4. PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100ul進行抽提反應混合液,以

除去石蠟油;否則,直接取5- 10μl電泳檢測。

STR檢測

短串聯重復(Short tandem repeats, STR)，又稱微wei星DNA(Microsatellite DNA)或簡單重復序列(Simple repeat sequence, SRS或SSR)，是廣泛存在于原核生物和真核生物基因組中的核苷酸重復序列。用新一代高通量測序技術對某物種的特定組織或細胞進行轉錄組測序，與參考基因組比較，可以得到基因表達差異、可變剪接、融合基因等遺傳調控信息。有絲分裂過程中DNA鏈之間的錯配引起的fu制滑動被認為是導致STR產生的較為常見原因，并且依據不同fu制單元大小的不同以及不同物種之間，fu制滑動發生的概率也不相同。

STR是以序列 (core repeat units) 首尾相連多次重復形成。98C變性2min后進行PCR循環，PCR循環參數為96C10s，50C5s，60°C4min，25個循環，擴增結束后設置4C保溫。每個STR的序列結構相同，長度為2-6bp，但其重復單位數目和重復區域的長度不同，因此STR在不同種族、不同人群之間的分布具有差異性，構成了STR遺傳多態性。不同個體之間在一個同源STR位點的重復次數也不同，因而同指紋識別一樣，STR位點分析也可對個體進行身份識別。通過識別個體基因組在特定位點的特定序列重復，即可創建其基因檔案。基于此，STR分析法已經成為一種重要的鑒定分析方法，應用于法醫學、qin子鑒定及細胞鑒定等領域。